О.Н. Царева1, Н.С. Ткачук1, В.С. Цибульская1, Д.Ю. Орлов1, М.В. Романова2, О.В. Лаба3, В.В. Куновский4
- Бактериологическая лаборатория Александровской клинической больницы, г. Киев
- Отделение оперативной гинекологии Александровской клинической больницы, г. Киев
- Кафедра акушерства, гинекологии и перинатологии факультета последипломного образования Львовского Национального медицинского университета им. Д. Галицкого
- Кафедра общей хирургии Львовского Национального медицинского университета им. Д. Галицкого
Резюме
Представлены результаты изучения антибактериальной активности вагинального антисептического душа Дреагин Бакт. Исследование проводили путем оценки угнетения бактериального роста на чашках Петри в эксперименте in vitro типичных патогенных штаммов микроорганизмов под действием Дреагин Бакт в виде нативного раствора и в разведениях (0,9 % раствором NaCl) до концентраций 1:2, 1:4, 1:8, 1:16. В качестве тест-культур использованы микробиологические штаммы S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, C. albicans. Выбор тест-культур обусловлен высокой частотой колонизации последних при воспалительных заболеваниях половых органов у женщин. На проведенных in vitro исследованиях доказана бактерицидная эффективность вагинального душа по отношению к типичным современным возбудителям гинекологической инфекции.
Вступление
В последние годы наметилась отчетливая тенденция к росту частоты хронической урогенитальной инфекции за счет рецидивирующих форм заболеваний [1−5]. Антимикробная резистентность (АМР) — явление не новое. Однако в настоящее время эта проблема приобрела критическое значение для здравоохранения [5−7]. Ежегодно по всему миру сообщается о новых случаях устойчивости бактерий [3,4]. Это коснулось, в том числе, акушерства и гинекологии [7, 8]. Наличие АМР приводит к тому, что применение препаратов первого ряда в рамках официальных программ лечения становится проблематичным, даже если резистентность наблюдается лишь у небольшого числа патогенных бактерий.
Инфекции органов малого таза у женщин имеют полимикробную этиологию. В течение последних 30–40 лет спектр возбудителей остается достаточно стабильным, включая, с незначительными расовыми и географическими вариациями, определенный набор возбудителей инфекций, передаваемых половым путем (N. gonorrhoeae и C. trachomatis), аэробную и анаэробную эндогенную флору влагалища (Prevotella spp., Porphyromonas spp., Bacteroidesfragilis, P. aeruginosa, Peptostreptococci spp., Gardnerella vaginalis, Escherichia coli, Haemophilus influenzae, S. aureus, C. albicans и аэробные стрептококки) [8−12].
Присутствие во влагалищном микробиоценозе условно-патогенных микроорганизмов, увеличение количества анаэробных бактерий повышают риск восходящего инфицирования эндометрия. К сожалению, большая часть инфекций органов малого таза (около 60 %) протекает бессимптомно или субклинически, что не мотивирует пациенток обращаться за медицинской помощью, затрудняет их выявление медицинскими специалистами и имеет тенденции к хронизации процесса. Решение вопроса возможно путем проведения рутинного микробиологического исследования материала из верхних отделов женского репродуктивного тракта при подозрении на воспалительные заболевания гениталий. Несмотря на то, что данное исследование требует значительных затратных средств и времени, оно является целесообразным и рациональным [7−9].
Среди различных лекарственных средств, используемых в комплексном лечении воспалительных заболеваний гениталий, ведущие позиции, безусловно, принадлежат антибиотикам [2, 4, 5, 7]. Однако длительное использование антибактериальных препаратов, особенно в отношении проблемных резистентных госпитальных штаммов микроорганизмов, сопровождается значительным развитием побочных эффектов и осложнений. Следует отметить, что в отличие от антибактериальных препаратов, к противомикробным средствам с местным, топическим действием (местные антисептики) резистентность бактерий или не развивается вовсе или имеет частичную кратковременную адаптацию [4, 7, 12, 13].
Таким образом, применение «локальных противомикробных средств» имеет хорошие перспективы эффективного и длительного применения в клинической практике, особенно в условиях современной «эскалации антибиотикорезистентности». Антисептические средства для местного применения имеют очевидный потенциал увеличения эффективности борьбы с патогенной и условно патогенной гинекологической инфекцией и занимают все более весомое место в комплексной медикаментозной терапии воспалительных заболеваний гениталий.
Цель исследования
Изучить антисептические свойства препарата Дреагин Бакт (вагинальный душ) в отношении типичных современных возбудителей гинекологической инфекции в эксперименте (in vitro).
Дизайн исследования
Свойства раствора Дреагин Бакт изучали in vitro путем оценки угнетения бактериального роста на плотных питательных средах типичных патогенных штаммов микроорганизмов, используя нативный раствор Дреагина Бакт и в разведениях 0,9 % раствором NaCl до концентраций 1:2, 1:4, 1:8, 1:16. В качестве тест-культур использовали музейные АТСС штаммы S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, C. albicans со следующими характеристиками.
Золотистый стафилококк (Staphylococc usaureus) — грамм (+) кокки в виде кремовых колоний с зоной полного гемолиза на кровяном агаре; каталаза (+), плазмокоагулаза (+), лецитиназа(+), пигмент(+), окислениеи ферментация маннита (+/+). Согласно рекомендациям Европейского комитета по определению чувствительности к антимикробным препаратам (EUCAST), перечень антибактериальных препаратов для выявления резистентности штаммов S. aureus следующий: цефокситин или оксациллин (как скрининг-тест для цефалоспоринов и карбапенемов), амоксициллин/клавуланат, фторхинолоны, аминогликозиды, эритромицин (как скрининг-тест для макролидов), гликопептиды (ванкомицин, тейкопланин), тетрациклины, линезолид.
Кишечная палочка (Escherichia coli) — грамм (−) палочка, оксидаза (−), подвижность (+), глюкоза (кг), лактоза (+), цитрат Симонса (−), уреаза (−), малонат (−), H2S (−), индол (+), фенилаланин (−), лизиндекарбоксилаза (+), ацетат Na (+), орнитин декарбоксилазы (+/−), аргининдегидролаза (−), β-галактозидаза (+). Перечень антибактериальных препаратов для исследования резистентности представлен в EUCAST по группам — пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы, монобактамы, фторхинолоны, аминогликозиды и др.
Клебсиелла (Klebsiella pneumoniae) — ассоциирована с инфекциями мочеполовой системы — грамм (−) неспороносные палочки, оксидаза (−), капсула (+), подвижность (−), глюкоза (кг), лактоза (к), индол (−), H2S (−), уреаза (+), цитрат Симонса (+), малонат (+), лизиндекарбоксилаза (+), орнитиндекарбоксилаза (−), аргининдекарбоксилаза (−), фенилаланин (−). Перечень антибактериальных препаратов, применяемых при изучении чувствительности K. pneumoniae, представлен в EUCAST по группам с учетом природной резистентности данного микроорганизма.
Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa) — грамм (−) палочка, неспорообразующая, строгий аэроб, имеет фруктовый запах, растет на простых средах, на среде Клиглера — характерный металлический блеск, продуцирует пигмент различных оттенков зеленого цвета, подвижны, окисляют, но не ферментируют глюкозу (OF +/−), гемолиз (+), оксидаза (+), растет при 42 ̊С, желатиназа (+), мальтоза (−), не способны утилизировать углеводы путем брожения. Псевдомонада обладает природной резистентностью ко многим антимикробным препаратам: ампициллин, амоксициллин/ клавуланат, ампициллин/сульбактам, цефалоспорины I поколения, цефотаксим, цефтриаксон, эртапенем, тигециклин, тетрациклин, хлорамфеникол. Из цефалоспоринов определяют резистентность только к цефепиму и цефтазидиму. Из фторхинолонов — к ципрофлоксацину и левофлоксацину. А также ко всем аминогликозидам (амикацин, гентамицин, нетилмицин, тобрамицин).
Кандида альбиканс (Candida albicans) — форма дрожжеподобных грибов, имеющих округлые, овоидные или удлиненные клетки, размножающиеся многополюсным почкованием. Образуют псевдомицелийиконцевые хламидоспоры. Является наиболее частым возбудителем кандидозов. Возбудитель оппортунистических инфекций человека, которые передаются контактным и половым путём. Аэробы, 21−27°С. Культивируются на среде Сабуро в течение 5 суток. Формирует круглые, блестящие, плоские или выпуклые с ровными краями колонии. На жидкой среде — помутнение. Определяют чувствительность C. albicans к миконазолу, натамицину, флуконазолу, клотримазолу, вориконазолу, итраконазолу, нистатину, амфотерицину-β, изоконазолу, циклопироксу, фентиконазолу, бутоконазолу, микафунгину.
Выбор тест-культур обусловлен высокой частотой колонизации последних при воспалительных заболеваниях половых органов у женщин [8−11, 13].
Для выделения вышеуказанных микроорганизмов используют кровяной агар, Сабуро агар и Эндо агар. С целью количественного определения микроорганизмов посев осуществляют по Голду, с последующим выделением и идентификацией этиологически значимых культур.
Подготовка культур. Для эксперимента использовались вышеперечисленные АТСС штаммы культур, выращенные на мясо-пептонном агаре, а культивирование грибов рода Candida осуществлялось на Сабуро агаре.
Эксперимент предусматривал два этапа.
- На первом этапе эксперимента готовили взвесь из суточных культур в физиологическом растворе, которая соответствовала стандарту мутности 0,5 Мак Фарланда (108 кое/мл). Далее приготовленную взвесь засевали на соответствующие чашки Петри с плотными питательными средами методом газона с помощью тампона. Чашки подсушивали, и затем в центр чашек наносили 0,05 мл (1 капля) Дреагина Бакт. После культивирования в течении 24−48 часов в термостате оценивали результаты: зона задержки роста — отсутствие колоний в месте нанесения Дреагина — свидетельствовала о проявлении антибактериальных свойств вагинального душа. Незначительный бактериальный рост (единичные колонии) — как слабые антибактериальные свойства. Полноценный бактериальный рост (множественные колонии) — как отсутствие антибактериальных свойств. В качестве контроля использовали аналогичные суточные тест-культуры микроорганизмов (без внесения исследуемого раствора).
- Второй этап эксперимента предусматривал использование раствора Дреагин Бакт в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 для изучения его антибактериальных свойств на культуру E. coli. Полученные результаты обработаны методами параметрической и непараметрической статистики (Excel 2010, Statistica 10). Анализ данных проводили с применением критериев Стьюдента и χ2. Статистически достоверным считали значение p < 0,05.
Результаты и их обсуждение
Первый этап исследований.
После нанесения раствора Дреагин Бакт на культуры патогенов S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, C. albicans и последующего культивирования в течение 24 часов на исследуемых средах наблюдалось полное отсутствие бактериального роста культуры P. Aeruginosa и S. Aureus (рис. 1, 2).
Аналогичные результаты получены с культурой грибов Candida albicans (рис. 3, 4).
После получения положительных результатов на первом этапе исследований (полное угнетение бактериального роста, т. е. отсутствие колоний в зоне нанесения раствора Дреагин Бакт) был проведен второй этап.
Рис. 1, 2. Дреагин Бакт vs P. Аeruginosae / Дреагинбакт vs S. aureus
Рис. 3, 4. Дреагин Бакт vs Candida albicans
Второй этап исследований
Изучение активности раствора Дреагин Бакт на культуру E. coli в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16. Для этого раствор готовили ex tempore путем разведения 0,9 % раствором NaCl. Объём нанесенного раствора был стандартным во всех исследованиях и соответствовал 1 капле (0,05 мл). Полученные результаты представлены на рисунках 5, 6.
По итогам второго этапа констатировано, что Дреагин Бакт, даже в разбавленном виде, проявляет выраженные антибактериальные свойства, но степень их выраженности зависит от концентрации.
Достоверные (экспериментально подтвержденные) антибактериальные свойства по отношению к культивированной культуре E. coli вагинальный душ продемонстрировал в концентрациях 1:1, 1:2 и 1:4, причем, несмотря на значительное разведение, даже до концентрации 1:8 и 1:16, остаточные антибактериальные свойства сохранялись (рис. 7), хотя и были выражены менее ярко.
Таким образом, Дреагин Бакт в виде растворов с концентрациями 100, 50, 25 % при локальном, местном использовании обладает выраженными антибактериальными / антисептическими свойствами в отношении золотистого стафилококка, кишечной палочки, синегнойной палочки и грибов рода кандида, что позволяет его позиционировать как эффективное антибактериальное средство, рефрактерное к АМР бактерий и обеспечивающее подавление роста большинства тестируемых патогенов.
Результаты первого и второго этапов эксперимента, которые по сути были демонстрацией качественной оценки антибактериальной активности вагинального душа Дреагин Бакт, позволили оценить его соответствие необходимым требованиям к гинекологическим противомикробным средствам с местным, топическим действием.
Многовекторность антибактериальной активности Дреагина Бакт обусловлена сочетанием растительных и синтетических компонентов, таких как масло чайного дерева (0,1 г); касторовое масло (0,5 г); лецитин (0,1 г); хлоргексидина диглюконат (0,29 %); бета-глициретиновая кислота (0,01 г), полученная из корня лакрицы; молочная кислота (рН 4,5); имидазолидинил мочевины (0,3 г); кетоглутаровая кислота (0,01 г), что обеспечивает бактерицидное, фунгицидное и вирулицидное действия. При этом ликвидируются такие симптомы, как зуд, жжение, раздражение слизистой, сухость влагалища или обильные выделения, неприятный запах. Благодаря молочной кислоте и касторовому маслу восстанавливается кислотно-щелочной баланс, регулируется рН, растет количество лактобактерий и нормализуется биоценоз влагалища, увлажняется слизистая оболочка, происходит отшелушивание умершего эпителия и обновление клеток, регулируется обмен веществ.
Рис. 5. Дреагин Бакт vs E. coli (в концентрациях 1:1 и 1:2)
Рис. 6. Дреагин Бакт vs E. coli (в концентрациях 1:4 и 1:8)
Рис. 7. Дреагин Бакт vs E. coli (в концентрации 1:16)
Важно, что антибактериальная активность раствора сохраняется при разведении, т. е. в присутствии крови, гноя, слизи и других органических веществ.
Для обеспечения клинической эффективности и предотвращения развития рецидивов необходимо индивидуально подбирать дозу в зависимости от степени тяжести инфекционного процесса. Короткий курс терапии и хорошая переносимость душа позволяют назначать его так часто, как возникает необходимость. Удобство применения (флаконы по 140 мл с канюлями для одноразового вагинального применения) и доступность делают Дреагин Бакт препаратом выбора для проведения интимной гигиены, что позволяет рекомендовать его для широкого использования в лечении и для профилактики инфекций, передающихся половым путем.
Выводы
- Проведенные іn vitro исследования позволяют констатировать выраженные антибактериальные и антисептические свойства вагинального душа Дреагин Бакт в отношении типичных современных возбудителей гинекологической инфекции.
- Дреагин Бакт обеспечивает подтвержденное іn vitro достоверное снижение микробного числа патогенных микроорганизмов.
- Дреагин Бакт оказывает выраженное антисептическое действие даже при наличии обильных вагинальных выделений и гарантирует достижение желаемого клинического эффекта в комплексном лечении женщин с воспалительными заболеваниями гениталий.
Литература
- Маковецкая М. Рациональная терапия урогенитальных микстинфекций: в фокусе комбинация ципрофлоксацин/орнидазол / М. Маковецкая // Здоров’я України ХХІ сторіччя. — 2013. — No 19. — С. 57.
- Антибиотики и противоинфекционный иммунитет / Под ред. Н. Д. Ющука, И. П. Балмасовой, В. Н. Царева. — М. : Практическая медицина, 2012. — С. 208–221.
- Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / Под ред. Страчунский Л. С., Белоусов Ю. Б., Козлов С. Н. — М. : Боргес, 2002. — 384 с.
- Летяева О. И. Оптимизация подходов к терапии урогенитальных микст-инфекций у женщин репродуктивного возраста : Тезисы XXXII научно-практической конференции «Рахмановские чтения» / О. И. Летяева // Дерматология в России. — 2015. — Т. 4, вып. S 1. — С. 35.
- Тихомиров А. Л. Современный алгоритм терапии воспалительных заболеваний половой сферы / А. Л. Тихомиров, В. Н. Юдаев, Д. М. Лубнин // Медицинская панорама. — 2003. — No 9. — С. 40–44.
- Про затвердження клінічних протоколів надання медичної допомоги хворим на дерматовенерологічні захворювання. Наказ МОЗ України No 312 від 08.05.2009 р. [Электронный ресурс]: Режим доступу — www.document.ua.
- Европейские стандарты диагностики и лечения заболеваний, передаваемых половым путем. — К. : Мед. література, 2003. — 264 с.
- Вдовиченко Ю. П. Бактериальный вагиноз — современные подходы к лечению и профилактике рецидивов / Ю. П. Вдовиченко, М. В. Хименко, С. И. Соболева. — 2009. [Электронный ресурс]: Режим доступа — www. organosyn. com. ua.
- Профилактика послеабортных инфекционно-воспалительных осложнений / М. В. Майоров, С. И. Жученко, Е. А. Жуперкова [и др.] // Медицинские аспекты здоровя женщины. — 2015. — No 4 (90). — С. 37–42.
- Kenyon C. The global epidemiology of bacterial vaginosis: a systematic review / C. Kenyon, R. Colebunders, T. Crucitti // Am. J. Obstet. Gynecol. — 2013. — N 209 (6). — Р. 505−523.
- Шалепо К. В. Оценка современных методов лабораторной диагностики бактериального вагиноза / К. В. Шалепо, В. В. Назарова, Ю. Н. Менухова [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. — 2014. — No 63(1). — С. 26–32.
- Бондаренко К. P. Микроэкологиявлагалища при дисбиозе / K. P. Бондаренко, Г. Ф. Хасанова, Д. Р. Аглямова [и др.] // Мать и дитя: матер. IX Всероссийского научного форума. — М., 2007. — С. 336–337.
- Kusters J. G. A multiplex real-time PCR assay for routine diagnosis of bacterial vaginosis / J. G. Kusters, E. A. Reuland, S. Bouter [et al.] // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. — 2015. — N 34(9). — P. 1779–1785.
Сведения об авторах
Ольга Николаевна Царева, заведующая бактериологической лабораторией Александровской клинической больницы г. Киева Адрес: ул. Шелковичная, 39/1, г. Киев, 01601
Наталья Станиславовна Ткачук, врач-бактериолог Александровской клинической больницы г. Киева
Валентина Степановна Цибульская, врач-бактериолог Александровской клинической больницы г. Киева
Дмитрий Юрьевич Орлов, биолог-бактериолог Александровской клинической больницы г. Киева
Мария Валентиновна Романова, врач акушер-гинеколог отделения оперативной гинекологии Александровской клинической больницы г. Киева
Оксана Владимировна Лаба, аспирант кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии факультета последипломного образования Львовского Национального медицинского университета им. Д. Галицкого
Владимир Владимирович Куновский, к. мед. н., доцент кафедры общей хирургии Львовского Национального медицинского университета им. Д. Галицкого